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RealHelix™ qRT-PCR Kit [v6] [UDG System] 은 단일 반응에서 최대 5개의 서로 다른 표적 RNA를 빠르게 다중 검출 가능하도록 최적화된 probe 기반의 qRT-PCR 시약입니다(고속 증폭: 45 분/40 cycles 또는 초고속 증폭: 25 분/40 cycles). Enzyme mix는 reverse transcriptase, antibody-coupled hot-start PCR enzyme, RNase inhibitor, 및 heat-labile UDG가 최적화된 형태로 혼합되어 있습니다. 5x 농도의 reaction buffer에는 Mg²⁺, dNTP/dUTP를 포함한 반응에 최적화된 필수 요소들이 포함되어 있습니다. 이 구성 요소들에 의해 본 시약은 빠른 PCR 성능과 더불어 높은 민감도(sensitivity), 정확도(accuracy) 및 특이도(specificity)를 보장합니다. 적용된 UDG system에 의하여 carryover contamination을 방지할 수 있습니다.

Figure 1. Multiplex qRT-PCR using the RealHelix™ qRT-PCR Kit [v6] [UDG System].

10-fold dilutions of purified SARS-CoV-2 viral RNA (from 10^-4 to 10^-7) spiked into a swab sample were analyzed using three different sets of target-specific primers and probes (N gene, ORF8, and S gene). The amount of viral RNA used in the 10^-7 dilution fold corresponds to approximately 10² copies. The probes were labeled with Texas Red (N gene), JOE (ORF8), FAM (S gene). The multiplex reaction was tested using the RealHelix™ qRT-PCR Kit [v6] [UDG System] on a real-time PCR instrument, Bio-Rad CFX96.

Figure 2. Multiplex qRT-PCR using the RealHelix™ qRT-PCR Kit [v6] [UDG System].

Plasmid clone mixtures harboring the partial region for each SARS-CoV-2 were used as templates in this reaction. SARS-CoV-2 clone mixture (10⁶, 10⁵, 10⁴, 10³, 10² copies) were analyzed using three different sets of target-specific primers and probes (N gene, ORF8 and S gene). The probes were labeled with Texas Red (N gene), JOE (ORF8), and FAM (S gene). The multiplex reaction was tested on a real-time PCR instrument, Bio-Rad CFX96.

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